Real-timePCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。
PCR的全称是:多聚酶链反应,用俗话说就是人为地制造一个环境,使双链基因片段进行复制、扩增目的基因:就是你想要扩增的基因片段
变性:是在热的环境下使双链解链,一般需要94摄氏度
引物:引导复制的开始,是一种RNA单链片段,能引导复制的起始位置
聚合酶:用的是Taq酶是在火山口找到的一种耐热的酶,在它的作用下以四种脱氧核苷酸(dNTP)为原料合成双链
延伸:通俗点说就是原来的模板链和新合成的单链组成一条新的双链的过程,延伸时间的长短、温度的高低会影响新双链的质量
PCR的大致过程
1、模板DNA
2、(第一轮循环):模板DNA变性和引物复性
3、(第一轮循环):引物延伸
4、(第二轮循环):新合成的双链变性和引物复性
5、(第二轮循环):引物延伸
……
如此往复,直至结束
之后可以泡个琼脂糖电泳看看扩增的情况,也可以测OD值,计算浓度
现在也有real time PCR,实时定量PCR,可以在间隔相等的时间测反应物的浓度,获得相对较准确的数据,比较简便.
总的来说,做分子生物学实验就是一项烧钱的活
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