革兰染色正确顺序：1、涂片固定；2、草酸铵结晶紫染1分钟；3、蒸馏水冲洗；4、加碘液覆盖涂面，染约1分钟；5、水洗，用吸水纸吸去水分；6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分；7、蕃红染色液（ 稀 ）染1分钟后，蒸馏水冲洗；8、干燥，镜检。
革兰染色步骤正确顺序
革兰氏染色是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性与革兰氏阴性。这一染色方法由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系。
原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色。
而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1、涂片固定。
2、草酸铵结晶紫染1分钟。
3、蒸馏水冲洗。
4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5、水洗，用吸水纸吸去水分。
6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7、蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。
原理
通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙；
因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
以上内容参考：百度百科-革兰氏染色
革兰氏染色的步骤和原理如下:
步骤:
1、首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。
2、固定。将载玻片在火焰上方固定。
3、染色。加路哥式碘液大概一滴，作用1 min后用水冲洗，注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。
4、脱色。用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。
5、观察。
干燥后，用油镜镜检观察，并做好记录。
原理：染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。
革兰染色在医学上的重要意义:
1、鉴别细菌：用革兰染色法可将所有细菌分成革兰阳性菌及革兰阴性菌两大类，便于初步识别细菌。
2、选择药物：临床上可很据病原菌的革兰染色性，选择有效的抗生素用于治疗。
3、与致病性有关：有些革兰阳性菌能产生外毒素，而革兰阴性菌则主要具有内毒素，两者致病作用不同。
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