2021-07-21 神奇的单链DNA合成技术(2)——生物素标记纯化

生物素-链霉亲合素系统同样可以应用于ssDNA的纯化。

在这种基于生物素标记的ssDNA纯化方法中,首先使用会进行PCR,不同之处在于使用的两条引物中,根据需要将其中一条引物的5'端进行生物素标记,另一条未非生物素标记的引物。因此,经过PCR扩增后,获得的dsDNA中一条链为生物素标记的ssDNA,另一条为未标记的ssDNA。后续将dsDNA变性(使用碱变性或者高温)后,使用联链霉亲和素进行生物素标记ssDNA的纯化。

先用限制性内切酶在DNA上切出两个粘性末端,然后在DNA连接酶的配合下用与这个粘性末端相配的有标志性的(可以是放射性和荧光性等同位素一般属于放射性)DNA片段标记出来,简单地说就是这样~

针对外显子序列设计捕获探针,与外显子DNA序列相互补。

探针上标记有生物素。

基因组DNA进行超声打断,与捕获探针杂交。

利用探针上生物素与带有链霉亲和素的磁珠结合,通过富集磁珠间接地获得全外显子测序文库。


欢迎分享,转载请注明来源:民族网

原文地址:https://www.minzuwang.com/life/1109925.html

最新推荐

发表评论

评论将在审核通过后展示