pcr扩增的原理和步骤

PCR扩增是以单链DNA为模板,4种脱氧核糖核苷酸为底物,在模板末端有引物存在的情况下,用酶进行互补链的延伸,多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。反应时先溶液加热,使模板DNA在高温下变性,双链解开为单链状态然后降低溶液温度,使合成引物在低温下与其靶序列配对,形成部分双链,称为退火再将温度升至合适温度,在热稳定DNA聚合酶的催化下,以脱氧核糖核苷酸为原料,引物沿DNA模板延伸,形成新的DNA片段,该片段又可作为下一轮反应的模板,如此重复改变温度,由高温变性、低温复性和适温延伸组成一个周期,反复循环,使目的基因得以迅速扩增。因此PCR循环过程为三部分构成:模板变性、引物退火、热稳定DNA聚合酶在适当温度下催化DNA链延伸合成。

PCR扩增的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR是一种体外DNA扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物PCR扩增仪延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。在环境检测中,靶核酸序列往往存在于—个复杂的混合物如细胞提取液中,且含量很低,对于探测这种复杂群体中的特异微生物或某个基因,杂交就显得不敏感。使用PCR技术可将靶序列放大几个数量级,再用探针杂交探测对被扩增序列作定性或定量研究分析微生物群体结构。PCR技术常与其他技术结合起来使用,如RT-PCR、竞争PCR、槽式PCR、RAPf)、ARDRA等。

PCR扩增:就是体外条件下,扩增DNA的技术。在模板DNA、引物和4dNTP在的条件下,DNA聚合酶的酶促合反应,经“变性—退火—延伸”多次循环,使DNA片段数量呈指数增加,从而在短时间内获得大量的基因片段。


欢迎分享,转载请注明来源:民族网

原文地址:https://www.minzuwang.com/life/1162838.html

最新推荐

发表评论

评论将在审核通过后展示